First-in-human immunomodulation mechanism research of chlorogenic acid in patients with recurrent high-grade glioma
這篇論文研究了綠原酸在復(fù)發(fā)高級別膠質(zhì)瘤患者中的人體免疫調(diào)節(jié)機制。
研究背景
1、高級別膠質(zhì)瘤（包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性星形細(xì)胞瘤）在標(biāo)準(zhǔn)治療（手術(shù)切除和同步放化療）后預(yù)后仍然很差，幾乎所有患者都會復(fù)發(fā)。
2、現(xiàn)有的抗血管生成藥物（如貝伐珠單抗）未能改善膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的總生存期（OS），且對于復(fù)發(fā)或?qū)μ婺虬罚?/font>TMZ）耐藥的高級別膠質(zhì)瘤，標(biāo)準(zhǔn)治療無效。
3、盡管免疫治療和靶向治療領(lǐng)域的新療法策略不斷增加，但仍急需有效的治療方法。綠原酸作為一種多功能的天然多酚化合物，具有抗腫瘤、神經(jīng)保護、抗炎、抗氧化等多種生物活性，但其抗腫瘤機制尚不明確。
研究方法
1、研究對象：在北京世紀(jì)壇醫(yī)院接受綠原酸治療的復(fù)發(fā)高級別膠質(zhì)瘤患者，共納入6例患者。所有患者在入組前均簽署了知情同意書。
2、樣本收集：在治療前和治療第15天分別采集患者的外周血樣本。使用RNA-seq技術(shù)對轉(zhuǎn)錄組進行測序。
3、數(shù)據(jù)處理：使用MATLAB軟件檢測差異表達基因（DEGs），并進行京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路和基因本體（GO）功能分析。
實驗設(shè)計
1、樣本處理：從外周血白細(xì)胞中提取RNA，使用NEBNext Ultra RNA Library Prep Kit for Illumina制備cDNA文庫，并使用Illumina HiSeq 150儀器進行測序。
2、數(shù)據(jù)分析：使用HISAT2進行基因組比對，FeatureCounts進行基因計數(shù)，計算每個基因的每千個轉(zhuǎn)錄本序列的片段數(shù)（FPKM）。使用MATLAB進行差異表達分析，篩選出P值小于0.05且變化倍數(shù)（FC）大于2的基因。
3、功能注釋：使用DAVID數(shù)據(jù)庫進行KEGG通路和GO功能分析，篩選出P值小于0.05的富集通路和術(shù)語。
結(jié)果與分析
1、研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸治療對部分患者（P3和P4）有效，使腫瘤病灶縮小，達到穩(wěn)定疾病狀態(tài)（SD）。P3和P4的無進展生存期（PFS）分別為8.1個月和4.9個月，總生存期（OS）均超過16.5個月，且至今仍存活。
2、差異表達基因分析顯示，P3和P4中共有269個基因上調(diào)和182個基因下調(diào)，這些基因主要富集在與免疫系統(tǒng)相關(guān)的通路和術(shù)語中。例如，上調(diào)基因包括CD52（CAMPATH-1抗原）、APOBEC3C（DNA脫氨酶）和組蛋白H2B類型2-E（HIST2H2BE），下調(diào)基因包括腫瘤壞死因子受體超家族成員10C（TNFRSF10C）和GTP活性相關(guān)蛋白（如ARHGAP30和RAC1）。
3、KEGG通路分析顯示，上調(diào)基因富集在Jak-STAT信號通路中，而下調(diào)基因富集在細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用和NF-κB信號通路中。GO術(shù)語分析顯示，上調(diào)基因涉及免疫調(diào)節(jié)、淋巴細(xì)胞分化和免疫反應(yīng)等多個過程。
P3和P4患者綠原酸治療前后的磁共振成像(MRI)圖像
總體結(jié)論
綠原酸可能通過改變基因表達水平，上調(diào)免疫系統(tǒng)活性，從而抑制腫瘤發(fā)展，使其成為一種潛在的抗腫瘤藥物。研究結(jié)果表明，綠原酸在復(fù)發(fā)高級別膠質(zhì)瘤患者中具有顯著的免疫調(diào)節(jié)功能，未來需要進一步研究以深入理解其功能機制。
這篇論文通過高通量RNA-seq技術(shù)，揭示了綠原酸在復(fù)發(fā)高級別膠質(zhì)瘤患者中的抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)機制，為未來的臨床應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)。